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土壤酸性木聚糖酶(Soil Acidic Xylanase,S-ACX)測定試劑盒說明書

更新時間:2025-01-16      瀏覽次數(shù):565


土壤酸性木糖酶(Soil Acidic Xylanase,S-ACX測定

試劑盒說明書

分光光度法 50 /24

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中,ACX 一般分離自耐酸的真菌,細菌及部分霉菌。

測定原理:

ACX 在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,進一步在沸水浴條件下與 3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),在 540nm 處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率,可計算ACX 活力。

組成:

產(chǎn)品名稱

BO6088-50T/24S

Storage

緩沖液:液體

20ml

4℃

試劑一:液體

5ml

4℃避光

試劑二:液體

25ml

4℃避光

說明書

一份

試劑三:粉劑×1 瓶,-20 保存,用時加入 4ml 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 4ml 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;自備儀器和用品:

天平、常溫離心機、震蕩儀、恒溫水浴鍋,可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿。

樣品理:

新鮮土樣風(fēng)干,過 30-50 目篩。

測定操作表:



對照管

測定管


土樣g

0.1

0.1

緩沖液μl

600

400

試劑一μl


200

混勻,50℃震蕩反應(yīng) 30min,立即 90℃水浴 10min,8000g,25℃離心 10min,取上清

500μl

試劑二μl

500

500

混勻,90℃水浴中顯色 5min,1ml 玻璃比色皿,對照管調(diào)零,測定A540。

S-ACX 計算公式

標準曲線:y = 2.5554x - 0.002 R2 = 0.9983

酶活定義:50℃,pH4.8 條件下,每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。

S-ACX 活力(μmol/d/g 土樣)=A540+0.002÷ 2.5554×V 反總×103÷ W÷T÷ 150

= 75.14×A540+0.002÷ W

V 反總:反應(yīng)總體積,0.6mlT:反應(yīng)時間,1/48d;10001mmol/L =103μmol/L;150:木糖分子量。

注意事項:

1. 保證震蕩反應(yīng) 30min,使酶與底物充分接觸。

2. 注意 90℃水浴防止爆開,以免改變反應(yīng)體系。



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