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土壤亮氨酸氨基肽酶試劑盒說(shuō)明書(shū)-相關(guān)技術(shù)文章

更新時(shí)間:2025-02-17      瀏覽次數(shù):559


土壤亮氨酸氨基肽酶(Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP

 

試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 /48 

 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

S-LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP 活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

測(cè)定原理:

S-LAP 分解L-亮氨酰對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺,后者在 405nm 有最大吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算S-LAP 活性。

試劑的組成和配制:

 

產(chǎn)品名稱

BO6031-100T/48S

Storage

試劑一:液體

35ml

4℃

試劑二:粉劑

1

-20℃

說(shuō)明書(shū)

一份

自備儀器和用品:

酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。

S-LAP 測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm,蒸餾水調(diào)零。

2、在試劑二瓶中加入 15ml 試劑一充分溶解(如較難溶解,可 60℃水浴加熱約 30min 促進(jìn)溶解);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

3、操作表:

試劑名稱

對(duì)照管

測(cè)定管

新鮮土樣g

0.05

0.05

試劑一μl

300


試劑二μl


300

混勻, 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后,8000g 4℃離心 10min,取 200μl 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中,405nm 處測(cè)定吸光值 A,計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-LAP 活力單位的計(jì)算:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義:每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

S-LAPμmol/d /g 土樣)=ΔA×V 反總÷ε×d×106÷W÷T=14.8×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; W:樣本質(zhì)量,0.05g。

b.  96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義:每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

S-LAPμmol/d /g 土樣)=ΔA×V 反總÷ε×d×106÷W÷T=29.6×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 Lε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,0.5cmT:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; W:樣本質(zhì)量,0.05g。


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